基因表达载体是一种被广泛使用的分子生物学工具，用于向细胞中导入外源基因并促进其表达。通常来说，基因表达载体的构建需要在细胞内进行，因为只有在适当的细胞环境下，才能保证基因表达载体可以正常地被转录、翻译和表达。

基因表达载体的构建包括以下步骤：首先，需要选择合适的载体，常见的载体包括质粒、病毒和转座子等。其次，需要将外源基因插入载体中，通常采用的方法是PCR扩增或合成基因片段，并进行克隆。最后，需要对构建好的基因表达载体进行鉴定和筛选，确保其具有所需的表达能力和选择性。

由于基因表达载体的构建需要在细胞内进行，因此需要考虑到细胞内环境对构建过程的影响。细胞内环境包括细胞壁、质膜、核膜以及各种细胞器等，这些结构对于基因表达载体的转录、翻译和表达都有重要的影响。此外，还需要考虑细胞的类型和状态等因素，以确保基因表达载体可以在特定的细胞中得到高效的表达。

总之，基因表达载体的构建必须在细胞内进行，因为只有在适当的细胞环境下，才能保证基因表达载体可以正常地被转录、翻译和表达。在构建过程中，需要考虑到细胞内环境对构建的影响，以确保构建出高效、可靠的基因表达载体。